人阴道黏膜干细胞的筛选与培养

目的:探讨人阴道黏膜干细胞（vaginal mucosa stem cells,VMSCs）的分离、筛选与适合的体外培养方法。方法:用胰酶、胶原酶混合消化法获得阴道黏膜细胞。以丝裂酶素C处理的小鼠成纤维细胞作滋养层细胞。将20min内黏附于Ⅳ型胶原的阴道黏膜细胞定为VMSCs。对筛选的VMSCs与原代人阴道黏膜细胞分别用碘化丙啶（PI）一步荧光染色法,用流式细胞仪检测其细胞周期。分为4组体外培养原代VMSCs,第1组用滋养层细胞+上皮细胞完全培养液;第2组滋养层细胞+DMEM/F12（3:1）;第3组无滋养层细胞+上皮细胞完全培养液;第4组无滋养层细胞+DMEM/F12（3:1）。培养至12天,比较各组的CK19、CK10阳性细胞的比例、克隆形成率（clony forming efficiency,CFE）与凋亡前传代的次数。结果:筛选的VMSCs与原代人阴道黏膜细胞的G0/G1细胞比例、CK19、CK10细胞阳性比例均有统计学差异（P＜0．05）。用滋养层细胞+上皮细胞完全培养液培养VMSCs12天的CFE与CK19阳性细胞比例最高,CK10阳性细胞比例最低,体外培养VMSCs能稳定传代15代以上。结论:Ⅳ型胶原快速黏附法可有效地筛选VMSCs。滋养层细胞+上皮细胞完全培养液为体外培养原代VMSCs的较佳方法。