2012年发现的新冠状病毒分子检测方法的建立与探针优化

被引：1

作者：

周为民 ^{[1
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陆柔剑 ^{[1
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耿合员 ^{[1
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李辉 ^{[2
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段希洁 ^{[1
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杨扬 ^{[1
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谭文杰 ^{[1
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机构：

[1] 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

[2] 上海辉睿生物科技有限公司

来源：

中华实验和临床病毒学杂志 | 2012年 / 06期

关键词：

冠状病毒属; 分子诊断技术; 核酸类;

D O I：

暂无

中图分类号：

R [医药、卫生];

学科分类号：

10 ;

摘要：

目的建立2012年确定的新冠状病毒的分子检测方法,并筛选优化引物与探针。方法依据最先发表的208bp长的新冠状病毒1b片段核酸序列,比对分析后设计合成常规RT-PCR引物1对及荧光定量RT-PCR引物1对与TaqMan探针2条(TZ1,TZ2),同时合成锁核酸修饰的TaqMan探针2条(LNA-TZ1,LNA-TZ2)。建立检测新冠状病毒感染的常规RT-PCR方法与4种荧光定量RT-PCR,分析比较其灵敏度与特异性,同时参照欧洲发表的2种荧光定量RT-PCR引物与探针对(upE,ORF1b)建立相应方法,以合成的阳性模板比较6对荧光定量RT-PCR引物与探针的检出灵敏度。结果所合成的常规RT-PCR与荧光定量RT-PCR引物与探针皆有较好特异性,不能扩增其他人冠状病毒模板及常见呼吸道病毒模板,检出下限达50～500拷贝/反应。锁核酸修饰TaqMan探针可改善荧光定量PCR检测方法的反应性能,经锁核酸修饰的TaqMan探针与常规TaqMan探针相比,检出率提高10倍左右,其中LNA-TZ1与upE探针对具最佳反应性能。结论本研究所建立的常规RT-PCR与荧光定量RT-PCR可用于新冠状病毒的分子检测,并推荐使用LNA-TZ1与upE探针对。本研究为新冠状病毒分子检测方法应用与改进奠定了基础。

引用

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