粉防已碱与钙调蛋白相互作用的荧光光谱研究

粉防已碱Tet是一种新的钙调蛋白（CaM）拮抗剂,它抑制CaM活化的Ca2+—Mg2+—ATP c。利用丹磺酰钙调蛋白（D—CaM）可方便地鉴测Tet与CaM的相互作用,直接证明了在CaM与Tet之间生成复合物CaM—Tet 我们制备的D—CaM,每个蛋白分子含1.3个丹磺酰基团,活化红细胞膜Ca2+—Mg2+—ATP c的生物活性与天然CaM基本相同。 当Ca2+与D—CaM结合时,丹磺酰基团环境疏水性增加,该荧光团产生较高的量子产率（增加1.6倍）,最大发射兰移（从512移兰至495nm）。存在Ca2+时,Tet使D—CaM的荧光强度进一步增加,谱线继续兰移,表明Ca2+及Tet诱导蛋白构象变化,改变了丹磺酰基团的微环境。 荧光滴定实验证明CaM与Tet结合的解离常数为1.8μM,两者的结合是绝对依赖Ca2+的。 药物Tet与CaM的结合可增强结合在CaM上的荧光探剂NPN的荧光,提示CaM不同疏水结合位之间存在变构相互作用。