Heymann肾炎受体相关蛋白融合蛋白的实验研究

通过Heymann肾炎受体相关蛋白的研究 ,探讨Heymann肾炎的分子发病机制。运用基因重组技术 ,将编码受体相关蛋白羧基端 10 8个氨基酸多肽 (RAP3 2 4 )的cDNA克隆到大肠杆菌高效表达载体pGEX。通过异丙基硫代 β D半乳糖苷 (IPTG )诱导 ,表达了分子量为 44× 10 3 的融合蛋白。经GST Sepharose4B亲和层析柱 ,纯化了融合蛋白。表达产物经Westernblot分析。羧基端受体相关蛋白融合蛋白在pGEX中得到高效表达 ,其分子量为 44× 10 3 。每升培养液纯化到 2 0～ 30mg的融合蛋白。Westernblot分析表明抗RAP3 2 4 融合蛋白的抗血清识别天然肾小管刷状缘膜抗原FXIA中分子量约 44× 10 3 的带。间接免疫荧光显示该融合蛋白抗体结合于肾小管刷状缘。表明受体相关蛋白羧基端 10 8氨基酸多肽链上存在致肾炎的病理性表型。