硫代反义寡核苷酸及脂质体对培养细胞的毒性作用

目的　评价硫代反义寡核苷酸 (antisenseoligodeoxynucleotide ,AS ODN)及脂质体对肾小管上皮细胞的毒性作用。方法　针对大鼠骨调素 (osteopontin ,OPN)的cDNA序列设计合成与OPNcDNA序列互补的AS ODN ,其所有碱基均经硫代修饰 ;用不同浓度的游离AS ODN或阳离子脂质体 (DOTAP)处理大鼠肾小管上皮细胞株 (NRK5 2E)不同时间 ,采用噻唑蓝 (MTT)比色法测定细胞的存活率。结果　硫代AS ODN在 0～ 4 0 μmol/L浓度范围内或DOTAP在 0～ 10 0 μg/ml浓度范围内处理的NRK5 2E细胞存活情况良好 ;浓度 4 0 μmol/L的硫代AS ODN或浓度 10 0 μg/ml的DOTAP对NRK5 2E细胞的毒性作用较小 ,72h内无时间依赖性 ;浓度 2 0 0 μg/ml的DOTAP对细胞的毒性具有明显的时间依赖性。结论　正常使用浓度的DOTAP或硫代修饰的AS ODN对大鼠肾小管上皮细胞株均无明显毒性作用 ,建议在转染实验中 ,AS ODN ,DOTAP浓度分别不超过 4 0 μmol/L ,10 0 μg/ml,处理细胞时间小于 72h。