DNA条形码技术在未知昆虫幼虫种类鉴定中的应用

目的:建立用DNA条形码技术鉴定未知昆虫幼虫种类的方法,探讨DNA条形码在物种鉴定中的实用性。方法:利用多细胞无脊椎动物细胞色素氧化酶I(CO1)的通用引物进行PCR扩增,PCR产物克隆到pGM-T Vector中并测序,分别对同一种未知昆虫的成虫、幼虫的线粒体COI基因的709 bp片段进行序列分析,并与GenBank中的序列相比较。结果:测序结果未知种类的成虫和幼虫序列只有1个碱基的差异,一致性高达99.9%,与GenBank中的米象Sitophilus oryzae的序列一致性高达99.6%,与玉米象Sitophilus zeamais的序列一致性为86.6%。并与GenBank中其他种类的同一段序列相比较,用ClustalW-2构建系统关系树。以未知成虫的形态分类特征为验证,可以判断未知种类为米象。结论:结果表明运用DNA条形码技术能准确进行昆虫幼虫种类的鉴定。