牛奶中志贺氏菌PCR检测方法的建立

根据Genbank志贺氏菌侵袭性质粒抗原H(ipaH)基因序列,自行设计引物,扩增特异的326bp核酸片段,经过优化PCR扩增条件,建立了志贺氏菌特异、敏感、快速的PCR检测方法,并对牛奶中的志贺氏菌进行了检测。特异性试验结果表明,志贺氏菌参考菌株均能扩增出特异的核酸片段,大肠杆菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,采用试剂盒提取基因组,该方法的敏感性可达到1.75×102cfu/mL。人工污染牛奶的模拟检测结果表明,PCR方法的检测限为1.75×103cfu/mL。