耐热碱性磷酸酯酶的基因克隆及在大肠杆菌中的表达

被引：8

作者：

袁有忠

盛小禹

吕鸿雁

佟石

毛裕民

机构：

[1] 复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室,复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室,复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室,复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室,复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海,上海,上海,上海,上海

来源：

遗传学报 | 1998年 / 04期

关键词：

耐热碱性磷酸酯酶; 基因克隆; 表达;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q785 [转化及克隆];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

以pUC118质粒为载体,以E.coil TGl为受体,构建了产耐热碱性磷酸酯酶(FD-TAP)的菌株Thermus sp.FD3041的染色体基因文库。在包含1.2万个转化子的文库中,90％的转化子插入有3～10kb的外源DNA片段。用菌落原位碱性磷酸酯酶显色法从文库中筛选到5个阳性克隆。对其中的1个克隆(pTAP362)所产的TAP进行了研究,发现克隆的TAP与出发菌株所产的TAP的热稳定性、最适反应温度和最适pH等性质都相同。通过做物理图谱和测定部分缺失的质粒的TAP活性,将TAP基因定位于2kb的BamHⅠ-HindⅢ DNA片段上。模拟PCR实验表明该酶可用于PCR扩增产物的检出。

引用

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