索比尼尔、托瑞司他及24种中药对醛糖还原酶的抑制作用

目的:观察24种中药及典型醛糖还原酶(AR)抑制剂索比尼尔、托瑞司他对AR活性的抑制作用,以筛选防治糖尿病慢性并发症的中药。方法:利用牛睾丸纯化的AR观察药物对酶促反应动力学的影响,酶活性反应体系包括:NADPH0.1mmol.L-1,DL-甘油醛10mmol.L-1,Na+-K+磷酸缓冲液67mmol.L-1和酶适量。将测得的酶促反应速度按双倒数(Lineweaver-Burk)作图法确定药物对AR的抑制类型,再用Dixon或Cornish-Bowden作图法求取药物对AR的抑制系数Ki,根据Ki值大小筛选出作用较强的中药。结果:索比尼尔为非竞争性抑制剂,托瑞司他为反竞争性抑制剂,除龙胆草、柴胡无抑制作用外,其余中药均为混合性抑制剂。槲皮素、黄连素、鬼针草、黄芩苷、水飞蓟宾、艾叶、知母、墨旱莲、野菊花、决明子、茜草、青果酶抑制作用较强,其Ki为2.1～617.2μg.mL-1,黄芪、葛根素、淫羊藿、紫竹草、吴茱萸、牡丹皮、肉桂、菟丝子、丹参、甘草抑制作用较弱,其抑制常数超过mg.mL-1水平。结论:利用本实验建立的方法可进行AR抑制剂的初步筛选。