表达产气荚膜梭菌α-β融合蛋白基因工程菌株的构建

用 PCR从含产气荚膜梭菌 α毒素基因的质粒 p XETA1中扩增出 α毒素基因 ,用 Nco I和 Bam HI双酶切该α毒素基因 ,回收 0 .95 kb的α毒素基因片段 ,再用 Nco I和 Bam HI双酶切含产气荚膜梭菌 β毒素基因质粒 p XETB2 ,与上述回收的 α毒素基因片段连接 ,转化至受体菌 BL2 1( DE3)中。经 Nco I、Bam HI、Not I酶切反应鉴定和核苷酸序列分析证实 ,获得了理想重组质粒p XCPAB2 ,该重组质粒含有α-β融合基因。重组菌株 BL 2 1 ( DE3) ( p XCPAB2 )经 IPTG诱导后 ,其表达产物经 ELISA检测和 SDS- PAGE分析 ,结果表明重组菌株可以高效表达α-β融合蛋白 ,该融合蛋白占菌体总蛋白的 2 2 .1 4%。用从 IPTG诱导的工程菌中提取的包涵体或经甲醛灭活的工程菌制成抗原免疫小鼠 ,免疫小鼠至少能抵抗 2 MLD的 C型产气荚膜梭菌的攻击。这表明构建的工程菌株 BL2 1 ( DE3) ( p XCPAB2 )可以作为预防仔猪红痢基因工程菌苗的候选株