miR-544a对非小细胞肺癌细胞系Wnt信号通路抑制因子GSK3β表达的调控作用

被引:4
作者
李化会 [1 ,2 ]
莫晓媚 [3 ]
孙桂荣 [4 ]
机构
[1] 青岛大学医学院
[2] 青岛市市立医院检验科
[3] 青岛市妇女儿童医院药剂科
[4] 青岛大学医学院附属医院检验科
关键词
miR-544a; 非小细胞肺癌; 肿瘤干细胞; GSK3β; Wnt信号通路;
D O I
10.13602/j.cnki.jcls.2013.10.028
中图分类号
R734.2 [肺肿瘤];
学科分类号
100117 [系统生物医学];
摘要
目的探讨微小RNA-544a(miR-544a)对肺癌干细胞的自我更新能力影响及其可能的机制。方法通过生物信息学预测miR-544a的靶向基因,用荧光素酶报告系统及western blot验证其靶向关系;构建稳定表达miR-544a的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系95C和95D,并用荧光定量PCR验证;用肿瘤球悬浮培养实验检测miR-544a在形成肿瘤球中的作用。结果生物信息学预测发现,miR-544a可以靶向调节Wnt信号通路的抑制子GSK3β,并通过荧光素酶报告系统得到了验证(F=201.37,P<0.01);western blot结果显示,miR-544a可以下调GSK3β的表达,而β-catenin、CD133蛋白表达水平明显上调(F分别为7.73,3.37,9.43,P均<0.01);荧光定量PCR结果显示,95C、95D细胞在转染miR-544a后,miR-544a表达水平增高,分别为20.51±0.97、15.16±1.38(F=418.05,P<0.01)。肿瘤球悬浮培养实验发现,稳定表达miR-544a的细胞能够反复形成具有肿瘤干细胞特性的肿瘤球。结论 miR-544a可以通过直接下调GSK3β的表达来激活Wnt信号通路,以维持肺癌干细胞自我更新能力。
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