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抗人VEGF受体Ⅱ胞外Ⅲ区单克隆抗体的制备
被引：14
作者：
李容
熊冬生
邵晓枫
李长辉
许元富
刘嘉
杨纯正
机构：
[1] 中国医学科学院/中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室
[2] 中国医学科学院/中国协和医科大学药物研究所
来源：
基金：
国家攀登计划;
关键词：
血管内皮细胞生长因子受体;
杂交瘤;
单克隆抗体;
D O I：
10.13431/j.cnki.immunol.j.20030052
中图分类号：
R392.33 [];
学科分类号：
摘要：
目的 制备人血管内皮细胞生长因子受体Ⅱ (Kinaseinsertdomaintontainingreceptor,KDR)胞外Ⅲ区的单克隆抗体 (McAb) ,探讨其抑制VEGF诱导的体外活性。方法 在大肠杆菌中表达重组KDR胞外Ⅲ区融合蛋白。融合蛋白经抗E tag柱分离纯化后免疫Balb/c小鼠 ,采用传统杂交瘤技术制备抗KDR胞外Ⅲ区McAb ,采用ELISA和Western免疫印迹鉴定其亚类和抗原结合特异性 ,并测定单克隆抗体对VEGF1 65刺激脐静脉内皮细胞株ECV30 4增殖的中和活性。结果 成功筛选出一株能稳定分泌抗KDR胞外Ⅲ区单克隆抗体的杂交瘤细胞株 (1D3) ,其分泌抗体亚类为IgG1。该McAb可明显阻断VEGF1 65对脐静脉内皮细胞株ECV30 4的刺激增生作用。结论 抗人血管内皮细胞生长因子受体KDR胞外Ⅲ区McAb可通过封闭KDR而抑制VEGF活性 ,McAb 1D3具有潜在治疗肿瘤的活性
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