家蚕变应原tropomyosin基因的克隆表达、纯化及其免疫学活性鉴定

目的对家蚕过敏原tropomyosin基因进行克隆表达,鉴定其免疫学活性。方法本研究提取家蚕总RNA,采用RT-PCR方法有效地扩增出tropomyosin片段,其长度为858bp,编码286个氨基酸。通过连入载体PET28a在大肠杆菌EscherichiacoliBL21(DE3)菌株中通过IPTG诱导得到重组家蚕原肌球蛋白。重组家蚕原肌球蛋白经过6His-tag蛋白纯化系统分离、纯化。经Westernblot检测该重组蛋白与家蚕过敏患者血清中IgE的反应性。结果19个病人血清反应中,有5个呈阳性,阳性率为26%。结论成功克隆表达了家蚕tropomyosin基因,经免疫学鉴定发现其具有过敏原性。