嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶基因perA在大肠杆菌中的高效表达

被引：4

作者：

王凡强

王正祥

邵蔚蓝

刘吉泉

徐成勇

诸葛健

机构：

[1] 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室

[2] 江南大学生

来源：

应用与环境生物学报 | 2002年 / 02期

关键词：

嗜热脂肪芽孢杆菌; 过氧化氢酶; 表达;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q786 [基因的表达];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

利用PCR技术得到嗜热脂肪芽孢杆菌 (Bacillusstearothermophilus)过氧化氢酶基因 perA ,将该基因与表达载体 pKK2 2 3 3连接构建重组质粒pK perA ,转化大肠杆菌过氧化氢酶HPⅠ和HPⅡ双缺突变株UM 2 ,得到重组大肠杆菌UM 2 1.酶活测定结果表明 ,表达产物具有正常的生物学活性 .SDS PAGE电泳结果显示出明显的特异性表达条带 ,单体Mr =86× 10 3 ,与嗜热脂肪芽孢杆菌所产酶相同 .实验表明 ,重组质粒在宿主UM 2中有较好的稳定性 ,在无选择压力条件下传代 6 0次基本保持稳定 ,传代 10 0次重组质粒保留 80 %以上 .摇瓶实验确定重组菌的最佳表达条件为 :IPTG浓度 ,0 .75mmol/L ;诱导时间 3h ;培养基起始 pH 6 .5 ;诱导温度 37℃ ;装液量 5 0mL/ 2 5 0mL .在优化条件下 ,重组菌产生的过氧化氢酶占菌体总蛋白的 8% ,酶活力可达 35U/mL ,是原始菌株BacillusstearothermophilusIAM110 0 1的 11.7倍 .图 2表 1参 10

引用

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页数：4

共 4 条

[1]

Cloning, nucleotide sequence, and expression in Escherichia coli of Bacillus stearothermophilus peroxidase gene ( perA). Suvit Loprasert,Seiji Negoro,Hirosuke Okada. Bacteriologia . 1989

[2]

Cloning, characterization, and expression in Escherichia coli of a gene encoding Listeria seeligeri catalase, a bacterial enzyme highly homologous to mammalian catalases. Haas A,Brehm K,Kreft J,Goebel W. Bacteriologia . 1991

[3]

[4]

Catalase: an enzyme with growing industrial potential. Patrick Dhaese. Chimica Oggi . 1996

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