长春花萜类吲哚生物碱生物合成途径中重要酶(DXR、SLS、G10H、STR)基因的克隆与表达

被引：29

作者：

韩梅 ^{[1
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赵博 ^{[1
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安志刚 ^{[1
]}

Thomas Rausch ^{[2
]}

祖元刚 ^{[1
]}

机构：

[1] 东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室

[2] 海德堡大学植物学研究所

来源：

植物研究 | 2007年 / 05期

关键词：

长春花; 萜类吲哚生物碱; 生物合成途径; Gateway克隆;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q943 [植物细胞遗传学];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

以分离提取的2周龄长春花植物幼苗总RNA为模板,经两步Gateway-PCR反应扩增得到长春花萜类吲哚生物碱合成途径中编码重要酶:5—磷酸脱氧木酮糖还原酶(DXR)、次番木鳖苷合成酶(SLS)、=牛儿醇-10羟化酶(G10H)和异胡豆苷合成酶(STR)的cDNA基因片段。利用BP重组酶将扩增片段克隆到Gateway化的入门载体pDONR201中,并进行测序验证。测序后的基因通过LR重组酶的作用转移到带有HIS标签的目标载体pETG10A中,构成重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到了高效表达,通过N i-TED树脂纯化方法得到了高纯度的蛋白。

引用

页码：564 / 568

页数：5

共 6 条

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