Caspase-3、-9表达上调参与缺氧诱导心肌细胞凋亡

目的　研究缺氧对心肌细胞天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶 (caspase)的激活效应。方法　培养的心肌细胞分别缺氧 0、3、6、12、2 4h后 ,Hoechst 3 3 3 42染色法检测细胞凋亡 ,MTT法检测细胞存活率 ,Westernblot、RT PCR方法分别检测细胞线粒体与胞浆中细胞色素c(Cytc)蛋白的变化以及caspase 9, 3mRNA表达的改变。结果　缺氧 2 4h心肌细胞出现典型的凋亡 ,细胞存活率显著降低 ;缺氧 3h线粒体Cytc未见显著变化 ,而胞浆中Cytc开始增多 ,缺氧 2 4h线粒体中已不能检测到Cytc ,胞浆中维持在峰值水平。缺氧可上调心肌细胞caspase 9, 3基因表达 ,两者表达变化趋势一致 ,缺氧 3h即开始明显增高 ,在观察的 2 4h内持续处于高表达状态。结论　缺氧可致心肌细胞线粒体Cytc大量释放至胞浆中 ,cas pase 9基因表达增高 ,并进一步导致caspase 3激活 ,从而证明缺氧可诱导心肌细胞中线粒体依赖的caspases途径激活 ,从而导致细胞凋亡。