人血管生成素1的克隆、序列分析和单酶切法构建毕氏酵母表达载体

被引：1

作者：

马腾 ^{[1
]}

刘学政 ^{[1
]}

刘丽波 ^{[2
]}

范海鹰 ^{[3
]}

机构：

[1] 辽宁医学院解剖教研室

[2] 中国医科大学神经生物学教研室

[3] 本溪市公安局技术一大队

来源：

中国组织工程研究与临床康复 | 2007年 / 06期

关键词：

血管生成素1; 逆转录聚合酶链反应; 克隆,分子; 序列分析;

D O I：

暂无

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

1001 ;

摘要：

目的:从人胎盘中克隆血管生成素1基因,并分析其结构特征,单酶切法构建毕氏酵母表达载体pPIC9K/Ang-1,为进一步研究血管生成素1防治糖尿病视网膜病变的血管渗漏奠定物质基础。方法:实验于2003-11/2004-06在北京大学医学部细胞系完成。提取人胎盘组织总RNA,用反转录聚合酶链式反应技术扩增出血管生成素1基因片段,并将其克隆到PGEM-TEasy载体中进行序列分析,用小牛肠碱性磷酸酶法去除线性化的pPIC9K质粒DNA两端磷酸基,以防止质粒自身环化,再亚克隆到毕氏酵母表达载体pPIC9K中。结果:①经甲醛变性胶电泳鉴定,成功从胎盘组织中提取出总RNA,RNA的完整性和纯度符合进一步的酶反应要求。②胎盘组织总RNA经oligo-dT引物反转录,用人血管生成素1特异一对引物进行聚合酶链反应扩增,10g/L琼脂糖胶电泳结果显示一条特异片段,大小为1.5kbcDNA片段。③成功构建了PGEM-T/Ang-1载体,Blast序列分析与GenBank中AY121504一致。两者成熟区cDNA的核苷酸和氨基酸同源性分别大于99%和98%,国人血管生成素1基因核苷酸序列的起始密码子ATG,终止密码子为TGA,共1497个碱基对。④成功构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体。结论:从人的胎盘中克隆血管生成素1基因无突变,成功构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体,满足表达蛋白质的需要。

引用

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页数：5

共 5 条

[1] 利用同序异尾限制性内切酶快速克隆多基因片段的新方法 [J].