半夏白术天麻汤对癫痫模型大鼠急性期和慢性期海马神经元miRNA表达谱及生物功能的影响

目的探讨癫痫急性期和慢性期发病机制,以及半夏白术天麻汤对癫痫干预的效应机制。方法将50只Wistar大鼠随机分为正常对照组、急性期模型组、急性期给药组、慢性期模型组、慢性期给药组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠采用氯化锂-匹鲁卡品诱导癫痫发作大鼠模型,造模后1～7天为急性期,8～30天为慢性期。造模成功1天后急性期给药组和慢性期给药组大鼠给予浓度为1. 548 g/ml半夏白术天麻汤2 ml灌胃,急性期给药组灌胃7天,慢性期给药组灌胃30天。其余3组给予2 ml蒸馏水灌胃,均每日1次。正常对照组大鼠5只和急性期模型组、急性期给药组大鼠10只一般行为学观察7天并取脑组织;正常对照组大鼠剩余5只和慢性期模型组、慢性期给药组10只一般行为学观察30天并取脑组织。运用miRNA芯片分析检测各组大鼠海马神经元细胞miRNA表达谱,生物信息学软件预测靶基因及KEGG富集分析,并采用实时荧光定量PCR验证各组间大鼠海马组织中部分差异基因表达,HE染色观察海马神经元细胞病理形态学改变。结果一般行为学观察和HE染色结果显示,半夏白术天麻汤具有抑制癫痫发作程度和频率的作用,并具有减轻和改善癫痫大鼠大脑海马神经元细胞损伤的作用,慢性给药组病理改善更好。急性期模型组和慢性期模型组与正常对照组比较得到10个重叠差异基因。两模型组前10位的通路中有3条重叠,即糖胺聚糖生物合成、长时程增强、赖氨酸降解。选取4个重叠miRNA通过实时荧光定量PCR验证:与急性期模型组比较,急性期给药组4个重叠miRNA差异无统计学意义(P> 0. 05)。与慢性期模型组比较,慢性期给药组rno-miR-146a-5p下调,rno-miR-218a-5p上调(P <0. 05)。结论糖胺聚糖的生物合成、长时程增强效应、赖氨酸降解均可能与癫痫的发生发展密切相关。半夏白术天麻汤有可能是通过调节相关miRNA及其靶基因和信号通路,改善相关生物功能从而发挥其抗癫痫作用,并且对慢性期效果更好。