猪瘟病毒E2(gp55)基因的克隆表达及其DNA疫苗的初步研究

用RT PCR方法从中国标准强毒株石门毒的细胞培养物中扩增获得了其结构蛋白E2基因cDNA ,将之克隆到 pGEM 5ZT载体 ,用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列 ,并推导出其对应氨基酸序列 ,与几个代表毒株Alfort株、Brescia株和C株相应序列进行比较 ,所测核苷酸序列与各株的同源性分别为 84 7%、92 6%和 95 2 % ,氨基酸序列的同源性分别为89 4% ,92 6%和 94 6% ;将此E2片段亚克隆至真核表达载体 pcDNA3 1 ,构建表达CSFVE2蛋白的重组质粒 pcE2 ,用脂质体转染法将 pcE2导入cos 7细胞进行瞬时表达 ,用针对E2蛋白的特异性单抗以间接免疫荧光法检测 ,结果E2蛋白在cos 7细胞中获得了正确表达 ,随之将pcE2质粒DNA进行小鼠肌内接种免疫 ,ELISA法检测证实在免疫后 2周和 4周的小鼠体内可诱导出较为明显的阳性血清 ,并高于E2单抗的阳性对照 ,病毒中和试验也表明DNA免疫后小鼠体内可诱导产生CSFV中和抗体 ;同时构建了能在昆虫细胞Sf9中表达GST E2和GST GFP E2融合蛋白的重组杆状病毒 ;上述研究结果为研制针对CSFV的DNA疫苗 ,亚单位疫苗及其诊断试剂打下了基础。