利用基因捕获技术建立稳定表达HBV的细胞模型

被引：3

作者：

何云燕

谭畅

李毅

黄爱龙

汤华

机构：

[1] 重庆医科大学感染性疾病分子生物学重点实验室

来源：

中国生物工程杂志 | 2007年 / 02期

关键词：

PU21基因捕获载体; 乙型肝炎病毒(HBV); 表达;

D O I：

10.13523/j.cb.20070205

中图分类号：

Q789 [基因工程的应用];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

pGEM-HBV1.3质粒经HindIII限制性内切酶消化,将HBV1.3全长DNA切下,与同样经HindIII限制性内切酶降解过的PU21连接,得到PU21-HBV重组质粒。将该重组质粒采用电击转染方法导入HepG2细胞中,G418筛选阳性克隆并以X-gal染色,RT-PCR、Southernblot等方法验证HBVDNA的插入和表达。PU21-HBV重组质粒经测序证明HBV1.3全长DNA正确与PU21载体连接,该重组质粒转染HepG2细胞后经G418筛选,得到一系列阳性克隆,Southernblot证实HepG2细胞基因组中含HBVDNA,RT-PCR结果表明HBVDNA在HepG2细胞中有功能基因的转录。HBV1.3已被整合在HepG2细胞染色体中并能稳定表达其RNA。稳定的HBV表达细胞模型构建成功。HBV表达细胞模型的建立,为进一步研究相关基因对HBV的转录、复制、转录后调节以及HBV各种蛋白的表达机理研究提供实验材料。

引用

页码：24 / 28

页数：5

共 9 条

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