禽流感病毒、新城疫病毒、猪瘟病毒和口蹄疫病毒多联RT-PCR诊断技术的建立

选择禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、猪瘟病毒(CSFV)和口蹄疫病毒(FMDV)基因组序列高保守区,按照多联PCR引物的设计要求,利用DNAsis计算机软件设计并合成了4对特异性扩增引物,扩增片段大小分别为470、320、200和140bp。以AIV、NDV、CSFV和FMDV的培养物提取RNA并反转录,进行RT-PCR特异性扩增。结果表明,各单项RT-PCR扩增产物与设计的4对引物之间的序列大小一致。在分别建立了各病毒单项RT-PCR及AIV与NDV、CSFV与FMDV二联RT-PCR的基础上,进一步优化各种多联PCR扩增条件,成功建立了上述4种病毒的四联RT-PCR技术。经特异性和灵敏度实验证明,本方法具有高度的特异性和灵敏性,其灵敏度为10pg总RNA。在3h内即可完成样品的检测。