炭疽杆菌噬菌体裂解酶基因在大肠杆菌中的表达及鉴定

被引：6

作者：

李晓静

张豪

付学奇

李彦英

陈璟

李玉玲

方宏清

陈惠鹏

机构：

[1] 军事医学科学院生物工程研究所,军事医学科学院生物工程研究所,吉林大学生命科学学院,军事医学科学院生物工程研究所,军事医学科学院生物工程研究所,军事医学科学院生物工程研究所,军事医学科学院生物工程研究所,军事医学科学院生物工程研究所北京,吉林大学生命科学学院,吉林长春,北京,吉林长春,北京,北京,北京,北京,北京

来源：

生物工程学报 | 2005年 / 02期

关键词：

噬菌体裂解酶; 炭疽杆菌; 大肠杆菌;

D O I：

10.13345/j.cjb.2005.02.010

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

1001 ;

摘要：

利用PCR方法扩增炭疽杆菌噬菌体裂解酶 (γlysin)基因 ,克隆至大肠杆菌表达载体pET2 2b中 ,经菌落PCR筛选、序列测定和酶切鉴定证实表达载体pET2 2b -γlysin构建成功 ,并在EscherichiacoliBL2 1(DE3)中获得了高表达。目的蛋白约占菌体总蛋白的 4 0 % ,5L发酵罐中的产酶水平高达 15g L。菌体经超声破碎 ,制备无细胞抽提液 ,StreamlineSP和SPHP柱层析以及SephacrylS- 10 0凝胶过滤三步纯化 ,得到分子量为 2 7kD单一条带的目的蛋白 ,薄层扫描分析显示其纯度大于 95 %。目的蛋白的收率为 19 1% ,纯化倍数为 35 0。生物活性鉴定重组的γ噬菌体裂解酶具有特异性 :可快速裂解炭疽杆菌 ,比活为 14 0 0u mg左右 ;而对大肠杆菌、枯草杆菌及蜡样芽孢杆菌没有裂解活性。

引用

页码：216 / 219

页数：4

共 5 条

[1]

Efficacy and durability of Bacillus anthracis Bacteriophages used against spores. Michael H Walter. Journal of Environmental Health . 2003

[2]

The pneumococcal cell wall degrading enzymes: Amodular design to create new lysins. Lopez R,Garcia E,Garcia P,Garcia JL. Microbial Drug Resistance . 1997

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[4]

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