棉铃虫中肠类胰蛋白酶的部分纯化和性质测定及其对苏云金杆菌δ-内毒素的降解作用

将棉铃虫Helicoverpaarmigera中肠液经SephadexG 75、DEAE SephadexA 50阴离子交换和CM SephadexC 50阳离子交换柱层析进行分离纯化 ,得到部分纯化的 2 4 5kD蛋白。该蛋白可以水解胰蛋白酶的专性底物BApNA和TAME ,不能水解胰凝乳蛋白酶的专性底物BTEE。蛋白酶抑制剂的抑制试验显示 ,TLCK、PMSF、STI及SBBI均可显著抑制该蛋白对BApNA的水解作用 ,而TPCK无抑制作用。由此推断 ,2 4 5kD蛋白是棉铃虫的类胰蛋白酶。以BApNA为底物 ,类胰蛋白酶的最适pH为 10 5～ 11 0。SephadexG 75分离得到了 4个洗脱峰 ,电泳结果显示 ,各洗脱峰均能使苏云金杆菌库斯塔克变种Bacillusthuringiensisvar.kurstakiHD 1原毒素降解为 60 5kD的活力片段。峰Ⅳ虽然不能水解BApNA和TAME ,但仍可对原毒素进行降解。而类胰蛋白酶活力最高的峰Ⅱ已将 60 5kD蛋白完全降解 ,当减小用量至 1 3时 ,才出现 60 5kD蛋白。因此 ,苏云金杆菌δ 内毒素在棉铃虫中肠内的降解有多种蛋白酶参与 ,类胰蛋白酶在其中起重要作用。CM SephadexC 50进一步分离得到的类胰蛋白酶可对原毒素进行降解 ,其降解作用受到TLCK、PMSF、STI及SBBI的显著抑制 ,不受TPCK的影响