抗FLAG标签单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

被引：8

作者：

闵玉涛 ^{[1
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王云龙 ^{[2
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李晨阳 ^{[2
]}

李玉林 ^{[2
]}

王真 ^{[3
]}

机构：

[1] 郑州轻工业学院

[2] 河南省生物工程技术研究中心

[3] 郑州职业技术学院

来源：

中国生物工程杂志 | 2007年 / 01期

关键词：

FLAG标签; 单克隆抗体; 免疫亲和层析;

D O I：

10.13523/j.cb.20070117

中图分类号：

Q813.2 [细胞融合工程];

学科分类号：

100113 [医学细胞生物学];

摘要：

碳化二亚胺法合成FLAG-BSA完全抗原,利用杂交瘤技术制备5株分泌抗FLAG标签单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备腹水,并对其进行纯化、分析和鉴定。制备交联抗FLAGmAb亲和层析柱,纯化带FLAG标签的融合蛋白,经SDS-PAGE电泳后薄层扫描分析纯度,用Western-blotting检测mAb对融合蛋白的反应性。结果表明:5株细胞分泌的单抗都为IgG类型、IgG1亚类,腹水效价均高于1∶106,且5株单抗与其它融合蛋白标签无交叉反应性;亲和层析纯化后蛋白纯度达85%以上,5株单抗均可用于融合蛋白的Western-blotting检测,建立了可用于FLAG融合蛋白纯化和检测方法。

引用

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