缺血皮质神经元DNA单链损伤引发Noxa表达的研究

目的:观察类缺血损伤神经元再灌注不同时间点DNA单链损伤情况和BH3-only家族成员Noxa的表达情况,初步研究DNA单链损伤与Noxa的表达关系。方法:应用β-Tubulin及Gap-43对培养的皮质神经元进行鉴定,利用流式细胞仪对培养的皮质神经元类缺血再灌注损伤后Noxa的表达情况进行研究。DNA聚合酶-ⅠKlenow片段介导的dATP-生物素切口末端标记方法(Klenow法)对缺血再灌注各时间点培养的神经元进行检测,并应用图象分析仪对Klenow法检测的结果进行平均灰度检测。结果:应用β-Tubulin及Gap-43培养的神经元80%为纯神经元,给予神经元类缺血处理后,在再灌注不同时间点Noxa的表达为在再灌注0.5,1h最强,而后随着再灌注时间的延长,Noxa的表达下降。Klenow法检测发现未经缺血处理的对照组神经元平均灰度为72.4±1.0,到达2h达高峰135.5±1.3,而后又逐渐降低,24h几乎看不到阳性细胞。结论:培养的皮质神经元类缺血再灌注处理后有Noxa的表达,在再灌注0.5h和1h为Noxa的表达高峰,DNA单链损伤高峰为2h,Noxa的表达高峰时间点早于DNA单链损伤高峰的时间点,说明NOXA的表达可能还有其他形式的DNA损伤介入。