银染mRNA差异显示方法的条件优化

ｍＲＮＡ差异显示技术是分离差异表达基因的强有力工具。本工作旨在优化无同位素的银染差异显示方法。以总ＲＮＡ为模板，用锚定引物与随机引物的组合进行ＲＴ－ＰＣＲ反应，ＰＣＲ扩增产物在变性的聚丙烯酰胺凝胶上电泳。用银染方法显示电泳ｃＤＡＮ条带，其结果是：（１）ＲＮＡ加入量为１～３μｇ，ＲＴ－ＰＣＲ反应能扩增出较多的ｃＤＮＡ条带，而低于０．５μｇ时扩增条带数目较少；（２）在３６～４２℃的范围内，随着温度的增加，扩增的条带减少；而４２℃时扩增的条带数目锐减，特别是当ＲＮＡ加入量小于１μｇ时几乎无条带显示；３６℃扩增的条带过多而趋于ｓｍｅａｒ；（３）优化了银染液程序，染色液和显色液中３７％甲醛的量分别为０．０３％～０．０５％和０．０７５％～０．１％，显色温度４～１２℃时，显示出清晰的条带；（４）用此方法获得数条电针镇痛有效与无效大鼠表达差异的ｃＤＮＡ条带。总之，通过改变参数条件，优化了快速简便的银染ｍＲＮＡ差异显示方法。