副溶血性弧菌直接溶血毒素基因的原核表达及产物的性质

被引：10

作者：

吴振龙

聂军

鲍慧宁

机构：

[1] 南京军区军事医学研究所医学昆虫寄生虫学研究室,第一军医大学流行病学教研室,安徽省铜陵市人民医院江苏南京

来源：

细胞与分子免疫学杂志 | 2001年 / 05期

关键词：

副溶血性弧菌; 直接溶血毒素; 大肠杆菌;

D O I：

10.13423/j.cnki.cjcmi.002927

中图分类号：

R378 [病原细菌];

学科分类号：

100103 ; 100705 ;

摘要：

目的实现副溶血性弧菌直接溶血毒素tdh基因在大肠杆菌中的表达,鉴定表达产物的生物学活性和免疫原性。方法构建tdh基因的原核表达系统NWⅡtdh/Trc99A/JM109,并在30℃条件下,用0.8mmol/LIPTG诱导表达。用SDS-PAGE分析蛋白表达;溶血试验检测表达蛋白的溶血活性。将表达产物腹腔注射免疫兔,用试管凝集反应试验检测特异性抗体。用溶血抑制试验检测该抗体体外对TDH溶血活性的抑制作用。结果NWⅡ在上述条件下诱导后,TDH呈可溶性、融合性表达。SDS-PAGE表明,表达蛋白的相对分子质量Mr约23000。薄层扫描显示,细菌的周质腔中的蛋白量最高,占总蛋白的13.4%。溶血试验表明,表达的蛋白具有溶血活性。用表达蛋白免疫兔产生的相应抗体,在体外具有抑制TDH溶血活性的作用。结论tdh基因在原核表达系统Trc99A/JM109中获得成功表达,为基因工程大规模制备TDH抗原,制备抗TDH的多克隆和/或单克隆抗体,构建基因工程菌苗,阐明该菌的致病机制打下了基础。

引用

页码：426 / 427

页数：2

共 4 条

[1]

免疫学实验.[M].林清华编;.武汉大学出版社.1999,

[2]

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[3] 副溶血性弧菌直接溶血毒素基因原核表达载体的构建 [J].

吴振龙 ;

聂军 ;

鲍慧宁 ;

徐兵 ;

王红 .

中华微生物学和免疫学杂志, 2000, (04) :42-42

[4]

副溶血性弧菌耐热性直接溶血毒素单克隆抗体的制备及其体内外中和作用的研究.[J].郑文燕;王悦治;陆德源;黄冬生;陈淑云;戴月兰;.中华微生物学和免疫学杂志.1986, 06

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