应用多联PCR对引发猪繁殖障碍有关病毒的检测 Ⅰ.JEV、PPV、PRRSV、PRV多联PCR引物设计附视频

首先在 Gen Bank查出日本乙型脑炎病毒 ( JEV )、伪狂犬病病毒 ( PRV)、猪繁殖与呼吸系统综合征病毒( PRRSV)和猪细小病毒 ( PPV)基因组的所有已知序列 ,对各病毒基因区域进行同源性分析 ,结合各病毒基因组的结构特点 ,发现并确定了 PRV的 g H基因区、JEV的多聚蛋白基因区、PRRSV的结构蛋白区和 PPV的 VP2基因区为各自病毒保守序列。利用 Goldkey软件对上述保守的特殊序列进行引物设计 ,要求 G+ C含量 4 7%～ 6 0 %,长度 18～ 2 5bp,Tm值 72～ 85之间。对设计出的 4种病毒引物再用 VNTI30软件进行引物之间二级结构分析 ,以避免引物之间形成稳定的结构二聚体。选出扩增片段分别为 PRV 12 5bp、PRRSV2 6 3bp、PPV 313bp、JEV 375bp的 4对引物 ,并进行了每对引物扩增片段序列的同源性分析或互补性分析 ,以避免它们之间具有过高的同源性。最终确定了这 4种病毒的多联 PCR引物 ,从而为建立这 4种病毒的多联 PCR方法奠定了基础。