人正常肾组织全长cDNA文库的构建及鉴定

目的　构建人正常肾组织的cDNA文库并鉴定文库质量。方法　运用mRNA 5′末端的模板转换方法以powerscript逆转录酶进行转录 ,在mRNA的 5′末端添加一段 5′ oligo做为延伸后的模板 ,从而富集全长cDNAs。扩增后的cDNAs经sfiⅠ酶切、柱层析洗脱 ,重组于λTripIEx2 载体并包装后 ,测定滴度、重组率 ,扩增文库。随机挑取 8个噬菌斑行PCR反应扩增插入片段。结果　构建的cDNA文库滴度为 2 .6× 10 6pfu·mL-1,重组率 >95 % ,扩增后滴度达 9× 10 11pfu·mL-1。 8个插入片段长度为 0 .7～ 2 .0kb。结论　构建的人正常肾组织cDNA文库为高效全长的cDNA文库 ,符合cDNA文库的要求 ,可以用探针、抗体等做免疫学筛选 ,进一步探寻与肾脏疾病相关的基因。