强MAR的分离及其体内外功能鉴定

被引：13

作者：

张可伟

王健美

杨国栋

郭兴启

温孚江

崔德才

郑成超

机构：

[1] 山东农业大学生命科学学院

[2] 山东农业大学生命科学学院泰安　

[3] 泰安　

[4] 泰安

来源：

科学通报 | 2002年 / 20期

关键词：

MAR分离; 核基质; 体外结合; β-葡糖醛酸酶; 外源基因表达; 高效表达载体构建;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q753 [基因在蛋白质合成中的作用];

学科分类号：

摘要：

将MAR（matrix attachment region）构建到外源基因表达盒两侧可以促进外源基因的表达克服基因沉默.用PCR方法从烟草和拟南芥中分离到4个新的MAR序列（TM2,TM3,AM1和AM2）,以水稻悬浮细胞为材料,提取大量细胞核制备核基质,以已发表的MAR（TM1）为对照,对4个新MARs序列进行体外结合实验.结果表明TM2和TM3与核基质的结合能力强于已知MAR序列.将4个新MARs和对照分别顺向构建到表达载体pBI121 gus基因表达盒两侧,用农杆菌介导法转化烟草,获得转基因植株.对转基因植株体内GUS酶活性检测表明,TM1,TM2,TM3和AM1均能使外源基因表达增强,其中TM2增强5倍,TM1增强1.5倍,TM2增强效果强于对照TM1.表明分离到一个新的强MAR,可以用于高效表达载体的构建.对5个MARS的序列特征、体外结合能力及外源基因表达影响三者之间的关系进行了分析,并对获得的强MAR在植物基因工程中的应用进行了讨论.

引用

页码：1572 / 1577

页数：6

共 8 条

[1] 豌豆核基质结合区的分离及其在转基因烟草中的功能分析 [J].

李旭刚 ;

朱祯 ;

徐军望 ;

吴茜 ;

徐鸿林 .

中国科学(C辑:生命科学), 2001, (03) :230-237

[2] 水稻细胞悬浮培养及再生植株的研究 [J].

叶和春 .

JournalofIntegrativePlantBiology, 1984, (01) :52-59

[3]

Use of matrix attachment regions (MARs) to minimize transgene silencing[J] . George C. Allen,Steven Spiker,William F. Thompson.Plant Molecular Biology . 2000 (2)

[4] THE ROLE OF SCAFFOLD ATTACHMENT REGIONS IN THE STRUCTURAL AND FUNCTIONAL-ORGANIZATION OF PLANT CHROMATIN [J].

BREYNE, P ;

VANMONTAGU, M ;

GHEYSEN, G .

TRANSGENIC RESEARCH, 1994, 3 (03) :195-202

[5]

A simple procedure for the isolation of pure nuclei from carrot embryos in synchronized cultures[J] . Kiyoshi Masuda,Seiko Takahashi,Koji Nomura,Masayasu Inoue.Plant Cell Reports . 1991 (6)

[6]

Assaying chimeric genes in plants: The GUS gene fusion system[J] . Richard A. Jefferson.Plant Molecular Biology Reporter . 1987 (4)

[7]

Dissection of the ability of the chicken lysozyme gene 5' matrix attachment region to stimulate transgene expression and to dampen position effects .2 Phi-Van L,Stratling WH. Biochemistry . 1996

[8]

A scaffold-associated DNA region is located downstream of the pea plastocyanin gene .2 Slatter R E,Dupree P,Gray J C. PlantCell . 1991

← 1 →