黄芩苷对热应激条件下猪近端肾小管(LLC-PK1)细胞凋亡率及B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白基因(Bax)表达的影响

为探讨不同浓度黄芩苷对热应激条件下猪近端肾小管细胞(pig kidney proximal tubular cells,LLC-PK1)细胞凋亡率及B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B-cellymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白基因(Bcl-2 associated X protein,Bax)表达的影响,将培养的LLC-PK1细胞随机分为7个组,Ⅰ组为37℃空白对照组,Ⅱ组为42℃单纯热应激1 h组,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ组分别为用不同浓度黄芩苷(0.01、0.1、1、10和100μg/m L)处理组后42℃热应激1 h组,运用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测Bcl-2和Bax基因及蛋白的表达,流式细胞仪(Annexin V-FITC/PI双染法)检测细胞凋亡率。结果表明,与Ⅰ组相比,Ⅱ组能显著诱导LLC-PK1细胞Bcl-2 m RNA的表达(P<0.05),极显著诱导细胞Bax m RNA和蛋白的表达(P<0.01),能极显著降低细胞Bcl-2和Bax m RNA和蛋白的比值(P<0.01),极显著增加细胞凋亡率(P<0.01),但对细胞Bcl-2蛋白的表达无显著影响(P>0.05)。黄芩苷处理组与Ⅱ组相比,Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ组LLC-PK1细胞Bcl-2 m RNA的表达量均升高,其中Ⅴ组差异极显著(P<0.01),Ⅳ及Ⅵ组差异显著(P<0.05),Ⅲ及Ⅶ组差异不显著(P>0.05),而细胞Bcl-2蛋白的表达量与Ⅱ组相比均差异不显著(P>0.05);同样与Ⅱ组相比,黄芩苷处理的各组细胞Bax m RNA及蛋白的表达量均降低,其中Ⅴ及Ⅵ组差异极显著(P<0.01),其余各组差异显著(P<0.05);除Ⅲ组外,其他各组细胞Bcl-2和Bax m RNA及蛋白的比值与Ⅱ组相比均显著升高(P<0.05),其中Ⅴ组细胞Bcl-2和Bax蛋白的比值差异极显著(P<0.01);细胞凋亡率仅有Ⅲ组与Ⅱ组相比差异不显著(P>0.05),而Ⅴ及Ⅵ组细胞凋亡率极显著低于Ⅱ组(P<0.01),其余的Ⅳ和Ⅶ组显著低于Ⅱ组(P<0.05)。一定浓度范围内的黄芩苷(0.1～100μg/m L)可能通过下调热应激条件下LLC-PK1细胞Bax的表达,从而提高Bcl-2和Bax的比值,降低细胞的凋亡率,对细胞起到保护作用。本研究从分子水平研究黄芩苷缓解热应激对猪LLC-PK1细胞的损害作用,可为明确其解热机制提供理论基础,并为其在临床上的应用提供有价值的参考资料。