寡核苷酸芯片检测兽医病原菌耐药性的研究

被引：9

作者：

蒋红霞

陈杖榴

曾振灵

邓旭明

欧阳红生

李瑶

不详

机构：

[1] 华南农业大学广东省兽药研制与安全评价重点实验室

[2] 解放军军需大学动物科技系

[3] 联合基因科技集团有限公司广州

[4] 广州

[5] 长春

[6] 上海

来源：

中国农业科学 | 2004年 / 09期

基金：

广东省自然科学基金;

关键词：

Oligonucleotide array; 耐药性; 检测;

D O I：

暂无

中图分类号：

S852.61 [病原细菌];

学科分类号：

摘要：

利用寡核苷酸芯片(oligonucleotide array)对兽医临床常见病原菌耐药性检测进行了初步研究。设计1对兼并引物扩增3种病原菌(E. coli、S. aureus、M. gallisepticum)的gyrA基因片段,并用cy5-dCTP标记荧光。设计一系列检测病原菌对氟喹诺酮类药物耐药的寡核苷酸探针,将探针固定在APS-PDC法制作的Microarray上,用标记的PCR产物与之杂交,置于Scanarrray4000中扫描,利用ImaGene3.0软件对杂交图像进行分析。研究结果表明,设计的兼并引物能很好地扩增出3种病原菌的gyrA基因片段,与Microarray杂交后在相应的位点出现可检测的杂交信号,样本O78S(禽大肠杆菌)、SS(金黄色葡萄球菌)、S6-10(鸡毒支原体)的ratio比值均≥2,说明这3株是敏感株;样本EDr(犬大肠杆菌)、ECr(猫大肠杆菌)与a1探针(检测GyrA第83位氨基酸发生突变的探针)的ratio比值≤0.5,说明这两株是耐药突变株,均与样本的实际情况相吻合。说明利用Oligonucleotide array能快速准确地检测出GyrA亚基第83、87位发生突变的耐药菌株,是可行、有效、快捷的抗菌药耐药性的监测方法。本研究为进一步研制和开发兽医临床常见病原菌耐药性检测芯片打下初步基础。

引用

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