基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨虾青素对心肌成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的 观察虾青素（astaxanthin,ASTX）对转化生长因子β1（transforming growth factorβ1,TGF-β1）诱导的心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）I型胶原（collegeⅠ,ColⅠ）和Ⅲ型胶原（collegeⅢ,ColⅢ）表达的影响,并探讨其作用机制。方法 分离新生乳鼠的CFs,TGF-β1诱导CFs,使用ASTX(0、5、10、20、40、80、160μmol·L-1)预处理CFs 24h。采用MTT法测定不同浓度ASTX对CFs细胞活性的影响;采用DCFH-DA试剂盒检测CFs细胞内活性氧（ROS）生成;采用siRNA技术沉默Smad3基因,采用real-time PCR和Western blot检测Smad3沉默前后ColⅠ、ColⅢmRNA及ColⅠ、ColⅢ、Smad3蛋白表达水平。结果 ASTX在0～20μmol·L-1范围内不仅无明显的细胞毒性,且能够明显减少TGF-β1诱导的CFs内ROS生成（P<0.05）。ASTX能够明显抑制TGF-β1诱导的CFs ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达（P<0.01）,且呈浓度依赖性。此外,ASTX还可以明显下调TGF-β1诱导的CFs Smad3磷酸化（P<0.01）;使用特异性siRNA对Smad3基因沉默后,ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达亦明显减少（P<0.01）。结论 ASTX能够有效抑制TGF-β1诱导的CFs ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达,可能的机制是下调Smad3磷酸化。