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豆壳过氧化物酶的分离纯化及其性质研究
被引：43
作者：
刘稳
方靖
高培基
机构：
[1] 山东大学微生物技术国家重点实验室
来源：
关键词：
豆壳过氧化物酶，血红素，纯化与性质;
D O I：
10.13865/j.cnki.cjbmb.1998.05.020
中图分类号：
Q503, [];
学科分类号：
摘要：
从豆壳抽提液经硫酸铵分级沉淀，ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析，ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲合层析和Ｂｉｏ－ＧｅｌＰ－６０凝胶过滤，纯化了豆壳过氧化物酶（ｓｏｙｂｅａｎｈｕｌｐｅｒ－ｏｘｉｄａｓｅ，ＳｈＰ）．纯化酶的比活力为７０７７Ｕ／ｍｇ，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上显示出一条蛋白质带．ＳｈＰ分子量为３８０００，等电点为３．９；ＳｈＰ为一含血红素的糖蛋白，含糖量为１８．７％，光谱学分析揭示，在４０６ｎｍ处有一典型的Ｓｏｒｅｔ带，在５１０ｎｍ和６４０ｎｍ处有特征吸收峰．酶反应的最适ｐＨ在４．０附近，最适温度为４５℃；在ｐＨ２．５～１２．０之间较稳定，７５℃，保温６０ｍｉｎ，酶活力残余６８％，ＳｈＰ是一种良好的耐酸碱、耐热过氧化物酶．动力学分析求得ＳｈＰ的表观Ｋｍ（愈创木酚）为１．６２ｍｍｏｌ／Ｌ，表现Ｋｍ（Ｈ２Ｏ２）为０．３４ｍｍｏｌ／Ｌ．在所测定的化学试剂中，Ｎ－３、ＣＮ－、Ｆｅ３＋、Ｆｅ２＋和Ｓｎ２＋对酶有较强烈的抑制作用，而重金属离子Ａｇ＋、Ｈｇ２＋、Ｐｂ２＋、Ｃｕ２＋、Ｃｒ３＋以及ＳＤＳ和ＥＤＴＡ对酶活力无显著影响
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