吴茱萸碱联合RO3306对人肝癌细胞HepG2的协同抑制

【目的】探讨吴茱萸碱(EVO)联合细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)的特异抑制剂RO3306对人肝癌细胞HepG2的生长抑制、诱导凋亡是否具有协同增效作用。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测EVO诱导不可逆凋亡的时间转折点;采用MTT法、集落形成法、PI单染流式细胞术检测EVO和RO3306联合用药与单独用药比较是否具有协同增效作用(q>1.15为协同作用)。【结果】MTT法结果显示:作用16 h起,再撤药培养12 h与撤药前比较抑制率明显上升。流式细胞术检测表明:细胞同步化处理后吴茱萸碱作用12 h大部分细胞发生M期阻滞(M-arrest);作用20 h细胞发生M期滑移(M-slippage)。MTT法检测2μmol/L吴茱萸碱、2μmol/L RO3306及两者联合作用的抑制率分别是33.64%、6.10%和52.74%,q值为1.32。集落形成法显示:1μmol/L吴茱萸碱、2μmol/LRO3306和两者联合作用的抑制率分别是48.21%、11.13%和78.13%,q值为1.83;2μmol/L吴茱萸碱、2μmol/LRO3306和两者联合作用的抑制率分别是9.75%、66.8%和91.2%,q值为1.3。流式细胞术显示:2μmol/L吴茱萸碱、2μmol/L RO3306和两者联合作用的抑制率分别是23.7%、6.6%和44.8%,q值为1.31。【结论】吴茱萸碱诱导M-arrest发生于12 h左右,诱导不可逆凋亡的时间转折点为20 h左右,吴茱萸碱联合RO3306对HepG2具有明显的协同抑制作用。