ELISA法测定氨苄青霉素用多克隆抗体的制备与鉴定

被引：17

作者：

张建群 ^{[1
]}

刘翔 ^{[2
]}

杨扬 ^{[1
]}

郑晓冬 ^{[1
]}

机构：

[1] 浙江大学生物系统工程与食品科学学院

[2] 浙江大学电气工程学院

来源：

中国食品学报 | 2006年 / 02期

关键词：

氨苄青霉素; 多克隆抗体; 酶联免疫分析法;

D O I：

10.16429/j.1009-7848.2006.02.003

中图分类号：

TS207 [食品标准与检验];

学科分类号：

083201 ;

摘要：

采用戊二醛法和物理方法,分别以BSA、HSA、OVA为载体蛋白合成了免疫抗原和包被抗原,并通过紫外扫描法鉴定了合成的抗原为载体蛋白和氨苄青霉素的复合物。将偶联抗原用弗氏佐剂乳化后免疫新西兰大白兔,制备出多克隆抗体,并对ELISA检测条件进行了优化。实验得到酶标二抗的最佳稀释倍数为1600。Ag5、Ag6、Ag7包被抗原的最佳稀释倍数分别为6400、800和400,且在ELISA试验中,选择与免疫抗原合成方法不同的合成抗原作为包被抗原为佳。底物的最佳配方为10mL底物缓冲液+7μLH2O2+200μLTMB。酶标板选用Corning酶标板。在以上条件下测得6只兔子抗血清的效价在1×103～128×103之间。亲和性试验表明以物理方法直接合成的免疫抗原比戊二醛法合成的免疫抗原亲和性好。交叉反应实验证实,抗血清与阿莫西林有极高的交叉反应率(78%),而与其它结构相似的5种抗生素的交叉反应都很小。本检测方法的检测极限是4.17ng/mL。

引用

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