Taqman技术检测肿瘤细胞中端粒酶逆转录酶信使核糖核酸及表达的意义

目的　用定量Taqman技术检测人端粒酶逆转录酶 (hTERT)信使核糖核酸 (mRNA)以及在肿瘤细胞中表达的意义。方法　在Trizol提取总RNA后 ,将mRNA逆转录成互补脱氧核糖核酸 ,用Taqman技术定量检测hTERTmRNA ,并与经典逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法比较。结果　急性髓细胞白血病患者hTERTmRNA表达水平为 (5 2 9～ 7 3)× 10 4拷贝 / μl,平均 3 5× 10 3 拷贝 / μl,其阳性率 (90 3% )高于健康体检者 (5 6 % ,χ2 =2 9 9,P <0 0 5 ) ,但与经典RT PCR检出阳性率比较 ,差异无显著意义 (χ2 =1 3,P >0 0 5 )。Taqman技术灵敏度为 1 5～ 3拷贝 / μl,特异性为10 0 % ;在 (5 0～ 5 )× 10 8拷贝 / μl之间有良好的线性关系 ,相关系数为 10 0 % ;5 0和 5 0 0 0拷贝 / μl的标本的内变异系数 (CV) 1 7%和 2 0 % ,日间CV则分别为 3 7%和 2 9%。结论　Taqman技术是一种快速有效、灵敏度高、特异性良好的定量检测hTERTmRNA的方法。