猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因在昆虫细胞中的高效融合表达

对杆状病毒Bac to Bac表达系统的转座质粒pFastbac1进行改造 ,即在其多角体蛋白启动子下游插入谷胱苷肽 S 转移酶 (glutathione S transferase ,GST)基因 ,构建GST融合表达转座质粒pFGST。通过转座和转染Sf9细胞 ,证实该系统能高水平表达GST。采用PCR方法从pMT gp5 1质粒中扩增截去N端信号肽序列的猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)YA株ORF5基因 ,并将截短的ORF5基因片段克隆到pFGST中 ,使之与GST融合 ,构建的重组转座质粒pFGST 5 3转染DH1 0Bac ,提取大分子BacmidDNA ,转染Sf9细胞 ,获得能表达融合蛋白的高滴度重组病毒rvGST5 3。rvGST5 3感染Sf9细胞 ,SDS PAGE和Western印迹分析表明 :与GST融合的ORF5基因在Sf9细胞中获得高效表达 ,表达产物分子量为 45kD ,能与抗PRRSVE蛋白单克隆抗体发生特异性反应。将表达产物免疫小白鼠 ,经间接免疫荧光检测 ,免疫血清能使PRRSVYA株感染的MARC 1 45细胞呈较强的荧光着色 ,证实表达的融合蛋白具有良好的免疫原性。