ROCK阻断剂Y27632干预大鼠实验性肝纤维化的分子机制研究

目的观察ROCK阻断剂Y27632对实验性大鼠肝纤维化形成过程中组织病理学、细胞外基质成分及肝星状细胞中RhoA、Vinculin mRNA和RhoA、MLC蛋白质表达的影响,探讨Y27632治疗实验性肝纤维化的分子机制。方法雄性SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组和治疗组。模型组和治疗组动物给予60%四氯化碳0.1 mL/100 g皮下注射,2次/周,对照组给予等量的生理盐水皮下注射。治疗组从第4周起给予Y27632口服灌胃(30 mg/Kg),其余两组动物予以等量的生理盐水。于造模后第8周采集静脉血行放免法检测血清中PⅢP和Ⅳ型胶原的含量,取肝组织行组织病理学检查。另取雄性SD大鼠30只分为对照组(n=10)和模型组(n=20),模型组造模方法同前。分离培养肝星状细胞,采用模型组星状细胞充分伸展贴壁时(培养8～10 d)为干预时间,并将模型组进一步分为非干预组和干预组,干预组采用终浓度为50μmol/L的Y27632干预,非干预组加入等量的生理盐水,1 h后观察细胞形态,收集各组细胞以RT-PCR检测RhoA和Vinculin mRNA表达,Western blotting检测RhoA和MLC蛋白的表达。结果与模型组相比,给予Y27632后组织病理学显示治疗组肝纤维化程度明显减轻,血清中PⅢP和Ⅳ型胶原的含量显著下降。细胞学试验显示,非干预组RhoA、Vinculin mRNA和RhoA蛋白的表达较对照组明显增强,给予Y27632干预后表达强度减弱。而对照组大鼠肝组织中MLC蛋白质呈阳性表达,非干预组其表达强度明显下调,给予Y27632后表达强度有所增加。结论 Y27632能有效干预实验性大鼠肝纤维化的形成,其分子机制可能与其调控星状细胞中RhoA和MLC有关。