高效液相色谱-荧光法测定SLE患者血清色氨酸及其代谢产物

目的建立一种同时测定血清色氨酸(tryptophan,Trp)、犬尿氨酸(kynurenine,Kyn)和犬尿喹啉酸(kynurenic acid,Kyna)的高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FD),并用此法检测SLE患者血清中Trp及其代谢产物Kyn、Kyna的含量。方法血清标本经0.624 mol/L的高氯酸溶液去除蛋白质后取上清液20μl直接进样分析测定。色谱柱为Hypersil C18柱,流动相为0.20mol/L醋酸锌、8.3 mmol/L醋酸和2.5%的乙腈;流速为1.5 ml/min;荧光检测激发波长和发射波长在0～11 min分别为365nm和480 nm,11～15.5 min变换为344 nm和404 nm,15.5～20 min为254 nm和404 nm。采用建立的方法测定体检健康者和SLE患者血清Trp、Kyn和Kyna的含量。结果Trp的线性范围为0.610～196μmol/L,最低检出浓度为0.005μmol/L,平均回收率为103.71%;Kyn线性范围为0.049～98μmol/L,最低检出浓度为0.025μmol/L,平均回收率为97.45%;Kyna线性范围为1.050～1 047 nmol/L,最低检出浓度为0.050 nmol/L,平均回收率为100.60%。日内、日间测定值的变异系数均小于5%。苯丙氨酸、酪氨酸、5-羟色胺对测定均无干扰。与正常对照组比较,SLE患者的Trp含量显著减少,Kyn和Kyna的含量及Kyn/Trp的比值显著增高。结论建立的HPLC-FD法能同时测定血清中Trp、Kyn和Kyna的含量,简便、快速、灵敏、特异。