人S100蛋白的表达及其抗血清的制备和脑脊液中S100含量测定方法的建立

目的　建立定量检测脑脊液 (CSF)及血清中S10 0蛋白的方法 ,探讨S10 0蛋白的检测在辅助诊断克 雅病 (CJD)中的应用。方法　利用脑cDNA文库 ,经PCR获得了S10 0基因并克隆至原核表达载体pGEX 2T上 ,在大肠埃希菌中表达了谷胱甘肽 S 转移酶 (GST) S10 0融合蛋白 ;融合蛋白经亲和纯化后 ,免疫家兔 ,制备抗体 ;抗体经纯化后 ,用生物素 (BNHS)标记 ,建立了可定量检测S10 0蛋白的生物素 亲和素系统ELISA方法 ,并初步用于临床脑脊液的检测中。结果　所表达的GST S10 0蛋白相对分子质量约为 35 0 0 0 ,以其为抗原制备的S10 0特异性抗血清具有良好的免疫反应性。建立了定量检测脑脊液中S10 0蛋白的双抗体夹心ELISA方法 ,对 3例“可能性的CJD”患者 (14 3 3蛋白阳性 )和 15例无痴呆症状患者脑脊液进行检测 ,结果显示 ,3例CJD患者脑脊液S10 0含量均超过2 90 0 μg/L,而在无痴呆症状患者组中 14例患者脑脊液S10 0含量都低于 0 .180 μg L。对正常人和CJD患者血清进行检测 ,显示S10 0蛋白含量个体间差异很大。结论　所建立的方法可用于脑脊液中S10 0蛋白的检测 ,进一步扩大标本量有助于明确脑脊液中S10 0蛋白的检测在辅助诊断CJD中的价值。