脐橙基因组DNA文库的构建

研究构建了一个脐橙基因组DNA文库。以‘大山岛’脐橙幼叶为试材 ,CTAB法制备基因组DNA ,经CsCl密度梯度离心纯化 ,获得了大片段 ( >10 0kb)高纯度基因组DNA。以Sau3AI部分酶切 ,酶切片段 3’凹端不完全补平后与LambdaGEM 12XhoIHalf SiteArms连接 ,连接产物用Packagene Extract包装 ,所得噬菌体在KW2 51寄主上铺平板。文库经过扩增并保存。对该文库特性研究表明 ,该文库包含了 2 .15× 10 6个单个克隆 ,背景低于10 0pfu/ μgDNA ,插入片段平均大小约为 17kb ,证明是一个较为完整的脐橙基因组DNA文库。