王百合单染色体DNA文库的构建

被引：15

作者：

党本元

胡赞民

周奕华

崔丽华

王兰岚

李良材

陈正华

机构：

[1] 中国科学院遗传研究所!北京

来源：

科学通报 | 1998年 / 02期

关键词：

王百合; 单染色体; DNA文库;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q943 [植物细胞遗传学];

学科分类号：

071007 ; 090102 ;

摘要：

以王百合为模式植物建立了简单快速分离植物单染色体及扩增和克隆其DNA的方法 ,即显微操作分离单个染色体并放入Eppendorf管中 ,经Sau 3A酶切后在染色体DNA片段两端加上Sau 3A寡核苷酸人工接头 ,然后以寡核苷酸人工接头中的一条链为引物进行两轮PCR扩增 .PCR产物为 30 0～ 2 50 0bp ,多数为10 0 0bp左右 ,经Southern杂交证实PCR产物来自王百合基因组DNA .对单染色体第二轮PCR产物进行克隆 ,构建单染色体DNA文库 ,得到约 10 0 0 0 0个重组子 .对其中 84个重组子进行分析 ,插入片段为 30 0～180 0bp ,平均为 780bp .与以往方法相比 ,此方法避免了在纳升体积内酶解、连接等操作 ,扩增底物只需一条染色体而不是以往的几十条 ,而且克隆片段 (平均 780bp)大于以往的报道 (平均 6 50bp) .

引用

页码：194 / 199

页数：6

共 3 条

[1] 王百合单条染色体和染色体片段的分离 [J].

胡赞民，崔丽华，王兰岚，李良才，陈正华 .

遗传学报, 1997, (03) :278-281

[2] 植物染色体显微切割技术的研究现状与展望 [J].

马有志 ;

徐琼芳 ;

辛志勇 .

遗传, 1997, (02) :49-51

[3]

Microdissection of plant chromosomes by argon-ion laser beam[J] . K. Fukui,M. Minezawa,Y. Kamisugi,M. Ishikawa,N. Ohmido,T. Yanagisawa,M. Fujishita,F. Sakai.Theoretical and Applied Genetics . 1992 (7)

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