体外建成带有λ噬菌体DNA片段的重组质粒

将大肠杆菌抗四环素及抗氨苄青霉素的质粒pBR322的DNA、大肠杆菌λ噬菌体DNA在体外经限制性核酸内切酶Hind Ⅲ切割,并用T4DNA连接酶连接后,以大肠杆菌K12HB101(recA-r（?）m（?）)为受体进行转化,采用插入钝化（insertional inactivation）方法选择重组质粒。利用环丝氨酸浓缩AprTc3转化体。在648株Apr转化体中选出120株无性繁殖系为AprTcs。随机挑出3株含有重组质粒的无性繁殖系进行大肠杆菌素El（colicin El）免疫特性测定及显微镜观察,证明为大肠杆菌素El敏感,并为典型的大肠杆菌形态。随机挑出一株含有重组质粒pAG-5的无性繁殖系,采用Zasloff等酸酚法进行重组质粒DNA提取,用Hind Ⅲ消化重组质粒DNA后进行琼脂糖凝胶电泳分析,观察到重组质粒pAG-5除pBR322质粒DNA带外含有λ-Hind Ⅲ的第5 DNA带。用重组质粒DNA再次对HB101(recA-r（?）m（?）)及K12 802(Su11+mK+)受体进行转化,转化体在含氨苄青霉素培养基平皿上生长,但在含四环素培养基平皿上不生长,再次证明为AprTc5.每微克重组质粒DNA Apr转化体为4.0—4.6×10～3。