大鼠Bdnf基因慢病毒载体的构建及其在骨髓间质干细胞中的表达

被引：10

作者：

黄东煜 ^{[1
]}

张志坚 ^{[1
]}

陈柏龄 ^{[1
]}

吴秀丽 ^{[2
]}

王柠 ^{[1
]}

张彦定 ^{[3
]}

机构：

[1] 福建医科大学附属第一医院神经内科

[2] 福建省神经病学研究所,福州

[3] 福建省师范大学生命科学学院

来源：

生物工程学报 | 2007年 / 02期

关键词：

慢病毒; BDNF; 骨髓间质干细胞; 大鼠;

D O I：

10.13345/j.cjb.2007.02.010

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

骨髓间质干细胞(MSCs)是目前基因工程正在探讨应用的靶细胞,为构建带有脑源性神经营养因子(Bdnf)基因慢病毒载体并使其在大鼠骨髓间质干细胞中表达,采用RT-PCR技术获得大鼠Bdnf基因编码区(CDS)片段,限制性内切酶酶切和基因重组构建慢病毒载体质粒PNL-BDNF-IRES2-EGFP,在脂质体介导下与包装质粒HELPER,包膜质粒VSVG共转染293T细胞包装生产慢病毒。所获慢病毒感染大鼠MSCs(rMSCs)后,PCR和免疫细胞化学法检测在rMSCs中Bdnf基因的插入和表达。结果显示所获的Bdnf基因经测序后与GenBank报道序列完全一致。重组慢病毒载体质粒PNL-BDNF-IRES2-EGFP经鉴定正确。三质粒共转染293T细胞成功,收集、浓缩病毒后测定其滴度为6.7×10～7TU/mL,PCR证实Bdnf基因插入病毒基因组。感染rMSCs后RT-PCR、免疫细胞化学染色及Western检测各组细胞均有BDNF蛋白表达,其中试验组BDNF-rMSCs更大量表达BDNF,与其余2组(Mock-rMSCs、rMSCs)比较差异具有统计学意义。构建带有Bdnf基因慢病毒载体并在大鼠骨髓间质干细胞中成功表达,为今后基因修饰干细胞的移植后长期观察研究奠定了基础。

引用

页码：235 / 240

页数：6