G250启动子的克隆及其在人肾癌细胞中的特异生物活性

被引：2

作者：

薛松 ^{[1
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郑骏年 ^{[1
]}

温儒民 ^{[1
]}

郝林 ^{[1
]}

毛立军 ^{[1
]}

孔德领 ^{[2
]}

机构：

[1] 徐州医学院附属医院泌尿外科

[2] 南开大学生命科学院

来源：

中华实验外科杂志 | 2008年 / 07期

关键词：

启动子; 克隆; 肾细胞癌;

D O I：

暂无

中图分类号：

R737.11 [肾、肾盂肿瘤];

学科分类号：

100214 [肿瘤学];

摘要：

目的克隆G250启动子并插入pGL3-Basic真核表达载体,探讨G250启动子在肾癌细胞中的特异生物活性。方法提取宫颈癌Hela细胞总DNA作为模板,设计两对引物进行PCR,获取两段不同长度的G250启动子片段。测序后分别将获取的551 bp和218 bp启动子片段克隆到pGL3-Basic载体中,构建双荧光素酶检测质粒pGLB-G551和pGLB-G218。将pGL3-Basic、pGLB-G551、pGLB-G218各1μg转染G250阳性宫颈癌Hela细胞、肾癌Ketr-3细胞。运用双荧光素酶检测技术,确定G250启动子的转录活性。结果电泳与测序结果显示,两段G250启动子片段与报道序列一致。酶切与测序结果显示,质粒pGLB-G551、pGLB-G218构建成功。转染pGLB-G551、pGLB-G218的Hela细胞相对荧光素酶活性分别为pGL3-Basic的11.07倍、10.36倍。Ketr-3细胞分别为pGL3-Basic的5.17倍、4.13倍。与空载体pGL3-Basic比较,pGLB-G551和pGLB-G218的相对荧光素酶活性均明显增强(P<0.05)。pGLB-G551和pGLB-G218比较,相对荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功克隆出肾癌特异性G250启动子,并证明具有良好转录活性,218 bp的启动子片段已具有G250启动子的所有启动效果。

引用

共 1 条

[1]

Molecular cloning and immunogenicity of renal cell carcinoma-associated antigen G250 [J].

Grabmaier, K ;

Vissers, JLM ;

De Weijert, MCA ;

Oosterwijk-Wakka, JC ;

Van Bokhoven, A ;

Brakenhoff, RH ;

Noessner, E ;

Mulders, PA ;

Merkx, G ;

Figdor, CG ;

Adema, GJ ;

Oosterwijk, E .

INTERNATIONAL JOURNAL OF CANCER, 2000, 85 (06) :865-870

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