高效液相色谱法反相梯度洗脱萤光检测分析血浆氨基酸

本文报告了采用高效液相色谱法反相梯度洗脱,邻苯二甲醛和β-巯基乙醇柱前衍生化,萤光检测分析血浆游离氨基酸。实验采用线性洗脱,在50分钟内可同时测定22种氨基酸。血浆样品的预处理简单,衍生化反应的时间仅需1分30秒,血浆样品的实际进样量少于1微升.本测定方法的精确度高,各个氨基酸保留时间的变异系数平均为0.33％±0.26％(SD),峰面积的变异系数平均为1.72％±1.25％(SD),各个氨基酸的浓度在10～300毫微克/微升的范围中,线性关系的相关系数平均为0.996±0.007(SD).准确性亦好,各个氨基酸的回收率平均为96.8％±4.5％(SD).实验中还比较和讨论了梯度型式和洗脱体积,不同固定相和色谱柱温度,流动相中缓冲溶液的pH值和离子浓度以及衍生化反应的时间和温度等因素对分析结果的影响。