盐生杜氏藻甘油-3-磷酸脱氢酶的分离纯化及其特性的研究

利用ＰＥＧ分级，ＤＥＡＥ离子交换层析，ＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ拟亲和层析，ＭｏｎｏＱ离子交换层析等手段，分离纯化盐生杜氏藻（Ｄｕｎａｌｉｅｌａｓａｌｉｎａ（Ｄｕｎａｌ）Ｔｅｏｄ．）甘油三磷酸（Ｇ ３ Ｐ）脱氢酶（ＥＣ１．１．１．８），得到比活为１２．６Ｕ／ｍｇ的电泳纯的酶，并对此酶的生化特性进行了研究。４％～２０％非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得全酶分子量约为２７０ｋＤ，ＳＤＳ ＰＡＧＥ表明该酶只有一种分子量约为６５ｋＤ的亚基，据此推测该酶应为同四聚体。酶催化磷酸二羟丙酮（ＤＨＡＰ）还原的最适ｐＨ值为７．５，催化Ｇ ３ Ｐ脱氢的最适ｐＨ值为１０。该酶对４个底物还原型辅酶Ⅰ（ＮＡＤＨ），二磷酸吡啶核苷酸（ＤＨＡＰ），辅酶Ⅰ（ＮＡＤ），Ｇ ３ Ｐ的表观Ｋｍ值分别为６３μｍｏｌ／Ｌ，２７２μｍｏｌ／Ｌ，１．５３ｍｍｏｌ／Ｌ，６．５２ｍｍｏｌ／Ｌ。该酶在保存过程中易失活。ＮＡＤＨ能降低酶失活的速度，而ＮＡＤ则不然。低浓度ＮａＣｌ对酶略有保护作用，但高浓度ＮａＣｌ加快酶的失活，且浓度越高效应越明显。