水貂肠炎病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA方法的建立

被引：6

作者：

陈涛 ^{[1
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赵建军 ^{[1
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张海玲 ^{[1
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柴秀丽 ^{[1
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闫喜军 ^{[1
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吴威 ^{[1
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钱爱东 ^{[2
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机构：

[1] 中国农业科学院特产研究所

[2] 吉林农业大学动物科学技术学院

[3] 吉林中特生物技术有限公司

来源：

中国预防兽医学报 | 2009年 / 31卷 / 09期

关键词：

水貂肠炎病毒; 原核表达; 重组VP2蛋白; 间接ELISA;

D O I：

暂无

中图分类号：

S852.65 [家畜病毒学];

学科分类号：

090601 ;

摘要：

为了对水貂肠炎病毒(MEV)疫苗免疫后抗体水平的监测和疫苗免疫效力的评价,本研究在分析MEV VP2蛋白抗原性的基础上,设计1对特异性引物克隆VP2蛋白抗原性较好的基因片段,将克隆的基因片段定向插入到pProEXHTb原核表达载体中,构建了VP2基因原核表达重组质粒pProEXHTb-VP2A,并实现在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,经鉴定表达的重组蛋白以包涵体形式存在,免疫印迹试验表明获得的重组蛋白具有与抗体较好的反应原性。应用His·Bind亲和层析柱纯化重组蛋白VP2A,以纯化后的重组蛋白作为ELISA诊断抗原,并对反应条件进行优化,初步建立了检测MEV抗体的VP2A-ELISA方法。确定了抗原最佳包被浓度为9.65μg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶10。判定标准为S/P值≥0.312为阳性,S/P值≤0.243为阴性,介于两者之间为疑似。该抗原不与犬瘟热病毒、阿留申病毒阳性血清反应,具有良好的特异性。采用VP2A-ELISA对180份水貂血清样品进行检测,结果显示VP2A-ELISA与HI试验的符合率达到87.8%,表明建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,为现地免疫貂群抗体检测和MEV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。

引用

页码：712 / 716

页数：5

共 11 条

[1]

犬细小病毒南京分离株（CPV-GN）VP2基因的克隆、序列分析及其部分片段的表达.[D].李希阳.南京农业大学.2005, 05

[2] 犬细小病毒2b亚型VP2基因的克隆及其B细胞抗原表位分析 [J].