液相杂交技术在聚合酶链反应酶联免疫检测的应用

目的　采用液相杂交技术 ,简化核酸杂交过程 ,建立乙肝病毒 (HBV)的液相杂交的聚合酶链反应 酶联免疫检测 (PCR ELISA)方法。方法　将 5′端标记生物素的PCR扩增产物与 5′端标记地高辛的探针呈液相混合 ,90℃ 2min ,5 5℃ 1min杂交。杂交后产物被链霉亲和素酶标板固定 ,经酶标记抗地高辛标记抗体结合、显色。结果　液相杂交酶联免疫检测条件优化 :探针浓度 3pmol 次 ,酶标记抗体稀释度 1∶10 0 0。液相杂交时间 3min ,固相杂交时间 12 0min ,但其检测结果无明显差别。检测灵敏度 1× 10 4拷贝 ml,34份HBsAg(+ ) ,HBeAg(+ ) ,抗HBc(+ )标本的阳性检出率为 97.1% ;34份HBsAg(+ ) ,抗HBe(+ ) ,抗HBc(+ )标本的阳性检出率 6 7.7% ;17份HBsAg(+ )、抗HBc(+ )阳性检出率 5 8.8% ;其他免疫检测指标组合标本为 34份 (5 .9% ) ;34份献血员标本均为阴性。结论　在PCR ELISA中使用液相杂交技术可使实验操作简便、快速 ,更适合临床实验室实际应用